液體培養(yǎng)基氨基酸的檢測(cè)濁度測(cè)定分析儀器
液體培養(yǎng)基中產(chǎn)生的氨基酸的檢測(cè)
微生物學(xué)測(cè)定法
液體培養(yǎng)基中氨基酸產(chǎn)生菌的檢測(cè)，通常要比瓊脂平板上腳檢測(cè)
花費(fèi)更多的時(shí)間，付出更大的勞動(dòng)。菌種的分離按前述方法從天然來(lái)
源中分離。從平板上挑取單個(gè)菌落，培養(yǎng)于各自的瓊脂，斜面內(nèi)。斜
面菌種長(zhǎng)成后，接種到通常由豐富的營(yíng)養(yǎng)成分混合組成的液體培養(yǎng)基
內(nèi)。種子培養(yǎng)基用于獲得在生理上處于氨基酸產(chǎn)生期的菌種。通常按5
g6的體積比，將種子培養(yǎng)物接種到發(fā)酵培·養(yǎng)基中。除非特殊的情況
另有不同的要求，接種菌種的發(fā)酵培養(yǎng)·基，一般于28～3了℃培養(yǎng)3
～5天。測(cè)定時(shí)，吸取5～10毫升桿·晶，首先讓其暴露于流動(dòng)的氣流
中約10分鐘，以便使游離細(xì)胞內(nèi)的氨基酸釋放出來(lái)。然后，將樣品冷
卻并離心，陳去細(xì)胞及其他懸浮的固形物，上清液供測(cè)定用。
(1)方法I 濁度測(cè)定法
利用濁度法以及下面介紹的滴定法測(cè)定液體培養(yǎng)物時(shí)，要求樣品
中不含有培養(yǎng)物內(nèi)的菌體細(xì)胞，將樣品通過(guò)為使液體滅菌而設(shè)計(jì)的微
生物過(guò)濾器，來(lái)除去細(xì)胞。
例如，當(dāng)測(cè)定賴氨酸等樣品時(shí)，要求將過(guò)濾好的培養(yǎng)液，按逐步
增加的體積(o～3毫升)加到三只為一組的清潔的無(wú)菌試管中，每只試
管盛有3毫升的二倍濃度的賴氨酸測(cè)定培養(yǎng)基。然后，用無(wú)菌蒸餾水將
體積增加到6毫升。將不接入菌種的發(fā)酵培養(yǎng)基與含有15微克／毫升賴
氨酸測(cè)定培養(yǎng)基相混合，組成對(duì)照樣品。其后的操作步驟也按上述同
樣步驟處理。所有試管都接種入一滴賴氨酸測(cè)定用的標(biāo)準(zhǔn)菌種腸膜狀
明串珠菌ATCC 8042號(hào)菌株。將試管于37℃保溫16～23小時(shí)，在此期間
測(cè)定菌體的生長(zhǎng)。
由菌體生長(zhǎng)產(chǎn)生的細(xì)胞密度或濁度，取決于樣品中存在的賴氨酸
的數(shù)量。已知樣品的濁度(光密度或OD)對(duì)賴氨酸濃度作圖，基本上得
到一條直線。人們可以用它由相應(yīng)的光密度讀數(shù)求出未知樣品中賴氨
酸的含量。
(2＼方法Ⅱ 滴定法
滴定法測(cè)定氨基酸所作用的技術(shù)，基本上與濁度測(cè)定法所使·用
的技術(shù)相類(lèi)似。兩者主要的區(qū)別在于測(cè)定反應(yīng)的方式不同。在濁度測(cè)
定法中，根據(jù)光吸收或濁度的變化來(lái)檢測(cè)測(cè)定用菌種對(duì)氨基酸的反應(yīng)
，而在滴定法中，根據(jù)生理反應(yīng)的變化，特別是酸的產(chǎn)生來(lái)進(jìn)行測(cè)定
。腸膜狀明串珠菌ATCC 8042菌株可由葡萄糖‘產(chǎn)生酸，其產(chǎn)生速度主
要取決于測(cè)定培養(yǎng)基中賴氨酸的濃度。
